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PIERCE超敏型發光液使用方法簡單說說
瀏覽次數:49發布日期:2022-06-22
  PIERCE超敏型發光液用于檢測直接或間接標記辣根過氧化物酶(HRP)的抗體及其關聯的抗原。其原理是,蛋白質或核酸在電泳后轉移到印跡膜上,以一抗及HRP標記的二抗結合膜上的目的蛋白,或以HRP標記的探針直接或間接結合膜上的核酸。洗膜后用本產品配制的ECL工作液,室溫孵育膜數分鐘,將印跡膜用保鮮膜包被粘貼固定于X光片曝光暗盒。然后轉入暗室將X光膠片壓在膜上曝光數秒到數小時,顯影定影后蛋白質或核酸條帶可清晰顯示在X光膠片上。
 
  采用獨特的發光底物系統,降低曝光背景的同時引入新型的氧化劑,大大提高試劑盒的穩定性,使其在室溫能穩定放置一年。除用于X光片,還可直接使用熒光CCD掃描,主要用于WB檢測以及化學發光免疫檢測系統。
 
  PIERCE超敏型發光液使用方法:
 
  1.常規電泳、轉膜、HRP標記抗體或核酸探針孵育、洗膜。注意用HRP標記lgG或用一抗-鏈親和素-HRP夾法。核酸雜交膜用HRP標記探針雜交,洗膜。
 
  2.洗滌膜上的HRP標記二抗時,配制新鮮發光工作液:分別取等體積的溶液A和B混合,放置使之升到室溫否則會減弱熒光強度。建議立即使用工作液,室溫放置數小時后仍可使用但靈敏度略有降低。
 
  3.用鑷子取出膜,搭在濾紙上瀝干洗液但勿使膜完全干燥。將膜完全浸入并與發光工作液(0.125ml發光工作液/cm2膜)充分接觸。室溫孵育1分鐘,準備立即壓片曝光。孵育時間過長不會增加靈敏度,有時還會導致曝光條帶異常。發光過程的本質是酶促反應,使用過少的發光工作液不利于反應進行,也會導致膜上條帶曝光不均,明顯降低靈敏度。為達節約目的可將膜剪小但勿降低發光液用量。
 
  4.用鑷子夾起膜,搭在濾紙上瀝干發光工作液。但勿洗去發光液。
 
  5.在X光膠片暗盒內面鋪一張面積大于膜的保鮮膜。將雜交膜貼在保鮮膜上,將保鮮膜折起來完全包裹雜交膜,去除氣泡和皺褶,可剪去邊緣部多余的保鮮膜。用濾紙吸去多余的發光工作液。用膠帶將覆蓋雜交膜的保鮮膜固定在暗盒內,蛋白帶面向上。
 
  6.在黑暗中放入X光膠片,分別曝光不同的時間如數秒到數分鐘。顯影沖洗。
 
  PIERCE超敏型發光液注意事項:
 
  1.步驟1-5可在日光燈下操作;但發光液曝露于強光下時間過久靈敏度可能略有降低,移到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印。
 
  2.長時間曝光或蛋白過量,將加深背景并使條帶強弱變化失去線性關系。曝光不足則條帶模糊。
 
  3.發光工作液孵育約1分鐘后膜上的條帶發光。強條帶發光在暗房中肉眼可見,低豐度蛋白條帶發光較弱甚至肉眼不可見但可使X光膠片曝光。不能簡單以肉眼觀察判斷條帶發光時間。肉眼不可見的熒光實際上可持續數小時并使X光膠片感光,因而弱帶可曝光1-10小時。如果曝光后條帶不佳,可用洗膜緩沖液洗膜,重新孵育二抗,然后重新用ECL發光和曝光。
 
  4.由于PIERCE超敏型發光液極其靈敏,強烈推薦大多數進口抗體起始濃度為一抗1:1000-1:4000,二抗1:2000-1:5000??贵w濃度過高將造成高背景或沒有條帶,導致失敗!
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